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Agronomía Tropical 22(1): 45-55. 1972

ESTUDIO PRELIMINAR SOBRE LAS VIROSIS EN PIMENTON
(CAPSICUM ANNUUM) EN VENEZUELA (a).
 

G. SALAS,* A. ARCIA** y G. MALAGUTI* 

(a) El trabajo es parte de la tesis presentada por el primer autor
 para optar al título de Licenciado en Biología (UCV).
* Centro de Investigaciones Agronómicas, Maracay, Venezuela.
** UCV, Facultad de Agronomía, Maracay, Venezuela.


INTRODUCCION 

El cultivo del pimentón dulce (Capsicum annuum L.), está ampliamente distribuido en Venezuela, encontrándose en zonas muy diferentes, en siembras reducidas tipo familiar, así como en plantaciones comerciales de 5 a 10 Has., donde es cultivado durante todo el año. También se encuentra ají o pimentón picante (Capsicum frutescens L.).

De las observaciones realizadas en varias siembras de pimentón, así como de las informaciones recogidas de varias instituciones que se dedican a problemas agronómicos (Centro de Investigaciones Agronómicas, Facultad de Agronomía, Servicio Shell para el Agricultor, Experta, etc.), se desprende que este cultivo está comúnmente atacado por enfermedades virales.

En la bibliografía venezolana sólo aparecen breves citas anteriores a este trabajo. STANDEN (20), menciona un mosaico en Capsicum annuum sin llegar a describirlo. HEROLD y DEBROT (9) reportan por primera vez. el virus del grabado del tabaco (TEV) en varias plantas, entre ellas C. frutescens. HEROLD (10), encuentra al mismo virus (TEV) en plantas de tabaco, pimentón dulce, pimentón picante, y tomate en varias localidades de los estados Aragua, Lara, Falcón y Guárico.

En el exterior existe una amplia bibliografía sobre el particular. En Estados Unidos, ANDERSON y CORBETT (1) en la parte central de Florida encuentran que los virus que comúnmente atacan este cultivo son: TEV, mosaico del tabaco (TMV), virus Y de la papa (PVY), la mancha anular del Aster (ARSV) y mosaico del pepino (CMV). ANDERSON (2) estudiando la propagación de estos cinco virus, encuentra que el PVY es la virosis de mayor importancia. SAKIMURA (16) en Hawaii. también hace notar la presencia del PVY en esa región. SILBERSCHMIDT (17) hace el primer reporte de los virus X de la papa (PVX) y PVY en América del Sur. GRACIA et al. (7) en Agentina, estudiando los virus que infectan los cultivos de tomate y pimentón, reportan los virus: mosaico de la alfalfa (AMV), el marchitamiento manchado del tomate (TSWV), además de los virus PVY y TMV.

En Francia se ha reportado la presencia del TMV, PVY, CMV y AMV (11, 12), y en Italia la del CMV y el AMV (6). En Turquía se ha encontrado TMV, CMV, PVX, PVY y asociacoines de PVX con PVY (14). Estudios realizados por NITZANY (13) en Israel, indican que el PVY se encontró en todas las regiones y durante todas las estaciones en 45% de las muestras examinadas, mientras que CMV y TMV ocurrían en 20 y 12 % de las muestras respectivamente. También reporta asociaciones virosas constituidas por PVY y CMV; PVY y TMV.

El objetivo del presente trabajo es determinar los virus transmisibles por vía mecánica, que atacan al cultivo de pimentón en el país; llegando a su identificación por medio de la reacción en huéspedes diferenciales y mediante el estudio de sus propiedades físicas; pero tal diagnóstico es apropiado solamente para virus que presentan síntomas muy típicos.

El conocimiento de las fuentes de inóculo y el rango de hospedantes puede ser útil para establecer asociaciones entre cultivos de alto valor económico (tabaco, tomate, etc.) para los cuales la inclusión del pimentón podría constituir un inóculo 'Permanente y sumamente perjudicial; especialmente cuando consideramos que hay enfermedades virosas comunes a todos los cultivos mencionados. 

MATERIALES y METODOS 

1. Forma de recolección del material 

Se tomaron, como muestras de plantas enfermas, las ramas con los síntomas más marcados; se colocaron en bolsas de polietileno y se llevaron al laboratorio. Cuando no pudo utilizarse de inmediato, el material se mantuvo refrigerado a 2°C.

2. Sitios de recolección 

El material recolectado procedía de siembras comerciales de diferentes zonas del país, como se indica en detalle en el Cuadro 6. Se recolectaron en total 53 muestras de los lugares siguientes: Villa de Cura, Cagua, Maracay (Aragua); Barquisimeto (Lara); Cumaná, Canaco, Carúpano (Sucre); Obispo (Barinas) y Guanarito (Portuguesa). 

3. Método de Inoculación 

El método seguido fue el de la inoculación mecánica usando Carborundum Nº 600 como abrasivo. El inóculo se diluyó en agua destilada (1:50). En otros casos se usó buffer fosfato (pH 7;0,35M). Las plantas inoculadas se mantuvieron en invernadero (25-33°C), observándose el desarrollo de los síntomas. 

4. Especies de plantas indicadoras 

La identificación de los virus se hizo en base a la sintomatología por ellos inducidas en plantas indicadoras, utilizándose las siguientes especies:

Nicotiana glutinosa, N. tabacum var. 'White Burley', N. tabacum var. 'Samsun', Datura stramonium, D. metel, Vigna sinensis var. 'SR', Cucumis sativus var. 'Palomar', Chenopodium amaranticolor, Physalis floridana, Capsicum frutescens var. 'Tabasco', C. annuum vars. 'Yolo Wonder', 'California Wonder' y 'Florida Giant' (1, 2, 8, 18, 21). 

5. Síntomas observados 

Lesiones locales (ll), aclaramiento de las venas (ac), mosaico (ms), deformación foliar (mal), marchitamiento (Mm), clorosis (el), encrespamiento del follaje (enc), necrosis sistémica (ns), muerte de la planta (R), sin síntomas (-), hospedante no utilizado (O) (Cuadros: 1, 2, 3 Y 4).

6. Propiedades físicas 

A los virus aislados, se les hizo el estudio de tres propiedades físicas: in activación térmica, punto final de dilución, longevidad en vitro; según métodos explicados en la literatura (19).

Para el TMV se seleccionaron los huéspedes de lesión local N. glutinosa, y D. stramonium. En el caso del TEV, se usó a D. stramonium como planta huésped indicadora. Para el PVY, se usó a Ch. amaranticolor y Ph. floridana, ambos huéspedes de lesión local.

Se probaron diluciones sucesivas comenzando con 1: 102 hasta 1: 10.6 La inactividad térmica se comenzó a 40°C llegando hasta 95°C cada 5°C (+ 0,5°C). En el caso del TEV, se añadió un intervalo a los 53°C.

La longevidad en vitro se estudió para el TEV y PVY; probándose la infectividad de los virus a las 24, 48, 72 horas, hasta los 16 días.

 RESULTADOS 

Se aisló virus del mosaico del tabaco (TMV) de las muestras procedentes de Barquisimeto, Guanarito, Carúpano y Obispo (Cuadro 6). En el Cuadro 1 se resumen los síntomas producidos por el virus en las plantas indicadoras. La reacción en los huéspedes: C. annuum var. 'Yolo Wonder', C. frutescens var. 'Tabasco', N. glutinosa, N. tabacum var. 'White Burley', D. metel, D. stramonium son típicas para identificar al virus: Las lesiones locales que se producen en estos huéspedes, consisten de manchas necróticas de centro más claro. La ausencia de reacción en los huéspedes Cucumis sativus y Vigna sinensis confirman la ausencia del CMV (Cuadro 1).

CUADRO 1. Síntomas producidos por el TMV en plantas indicadoras. 


.............. Capsicum annuum var. "Yolo Wonder" 11 
C. frutescens var. "Tabasco" 11
Datura metel 11
D. stramonium 11
Nicotiana glutinosa 11
N. tabacum var. "White Burley" 11
N. tabacum var. "Samsun"  ms
C. annuum var. "California Wonder" ms
C. annuum var. "Florida Giant"  ms
Chenopodium amaranticolor -
Cucumis sativus var. "Palomar" -
Vigna sinensis var. "SR"   -

El significado de los símbolos utilizados está incluido en "Materiales y Métodos". 

Al presentarse reacción diferente en las plantas: N. glutinosa, D. metel y D. stramonium con algunas muestras de TMV, se identificaron tres tipos del virus, los cuales fueron denominados TMV-a, TMV-b, TMV-c. Las reacciones que los diferencian se explican en el Cuadro 2. En el TMV -a, los tres huéspedes mencionados reaccionan solamente con lesión local (Fig. 1, arriba, izq.). En el tipo TMV -b, se produce necrosis sistémica, después de las lesiones locales en las plantas de N. glutinosa (Fig. 1, arriba, centro). La reacción diferencial para el TMV-c, consistía en la formación de lesiones locales seguidas de necrosis sistémica y muerte en las plantas de D. metel y D. stramonium (Fig. 1, arriba, der.) (Cuadro 2).  

Fig. 1.  arriba:  izq.: lesiones locales por TMV-a en Nicotiana alutinosa. centro: necrosis sistémica por TMV-b en N. alutinosa. der.: necrosis sistémica por TMV-c en Datura metal. abajo: izq.: síntomas del TEV sobre D. stramonium. centro: síntomas severos del complejo TMV + PVY en pimentón. der.: síntomas del PVY sobre pimentón.

Fig. 1.   
arriba:   
     izq.: lesiones locales por TMV-a en Nicotiana alutinosa. centro: necrosis sistémica por TMV-b en N. alutinosa.  
     der.: necrosis sistémica por TMV-c en Datura metal. 
abajo:  
     izq.: síntomas del TEV sobre D. stramonium.  
     centro: síntomas severos del complejo TMV + PVY en pimentón.
     der.: síntomas del PVY sobre pimentón.

 

CUADRO 2. Tipos de TMV aislados según la respuesta en huéspedes de lesión local. 


Plantas indicadoras TMV-a TMV-b TMV -c 

Nirotiana glutinosa 11 11 + ns + R 11
Datura metel  11 11 11 + ns
D. stramonium 11 11 11 + ns   

Otro virus aislado fue el TEV (Cuadro 6), en muestras procedentes de la región de Aragua y de Cariaco (Edo. Sucre). El Cuadro 3 resume los resultados en las plantas diferenciales. Las reacciones en C. frutescens var. 'Tabasco' y en D. stramonium, son típicas para identificar al virus. El marchitamiento en C. frutescens se presenta aproximadamente a los seis días de inoculadas las plantas. D. stramonrum reacciona primero con aclaramiento de venas, luego sigue el mosaico verde con deformación foliar (Fig. 1, abajo, izq.) (Cuadro 3). 

CUADRO 3. Reacciones del TEV en plantas diferenciales. 


............. Capsicum frutescens var. "Tabasco" Mm
Datura metel  -
Cucumis sativus var. "Palomar" -
Vigna sinensis var. "SR"  -
D. stramonium ac + ms + mal
Nirotiana tabacum var. "White Burley" ac + ms 
C. annuum var. "Yolo Wonder" ac + ms 
C. annuum var. "California Wonder" ac + ms 
C. annuum var. "Florida Giant" ac + ms 

Las muestras de la región de Aragua y de Cariaco procedían ambas de siembras comerciales de secano.

El tercer virus aislado correspondió a un tipo del PVY en muestras procedentes de Cumaná, en donde apareció asociado con TMV (Fig. 1, abajo, centro) y en una muestra de Villa de Cura.

El Cuadro 4 resume el procedimiento de aislamiento y separación de los virus del complejo (TMV+PVY). La separación se llevó a cabo en el huésped N. glutinosa en el cual el TMV queda restringido a lesiones locales y el PVY se manifiesta sistémico en las hojas. También se observan los síntomas típicos de cada virus por separado en las plantas indicadoras. El mosaico y encrespamiento foliar en C. frutescens, el mosaico en D. metel, y la reacción inmune de D. stramonium son características típicas para el virus PVY (Cuadro 4). 

CUADRO 4. Aislamiento y separación del complejo viroso TMV + PVY en plantas diferenciales. 


TMV + PVY



El PVY aislado no presentó ningún tipo de reacción en el huésped Ph. floridana a pesar de haber sido sometido a diferentes condiciones de temperatura y luminosidad (25 - 33°C - luz natural; 200C - luz baja; 20°C luz natural). Esto unido al hecho de encontrar diferencias también en cuanto a propiedades físicas (Cuadro 5) (5, 16, 18), nos hace sospechar de que se trata de un tipo diferente de los ya mencionados en la literatura. 

CUADRO 5. Propiedades físicas de los virus estudiados (a)  


Propiedades físicas TMV TEV PVY

Punto final de dilución 1/10 1/103 1/105
Inactivación térmica (ºC) 90-95 53-55 80-85
Longevidad en vitro (días) - 3

(a) Las cifras expresan resultados de 10 plantas por cada virus y por cada prueba. 

Los resultados obtenidos para las propiedades físicas de los tres virus aislados, aparecen en el Cuadro 5. Los datos obtenidos para el virus TMV y TEV coinciden con los reportados para estos virus (18) (Cuadro 5). 

DISCUSION 

Los resultados indican que los virus TMV, TEV, PVY están presentes en cultivos comerciales en grado variable de importancia (Cuadro 6).

El TMV parece ser el virus más generalizado encontrándose en altos porcentajes en muestras del centro durante diversas épocas del año, del oriente del país y en menor escala en el occidente. Por la sintomatología desarrollada en los huéspedes diferenciales empleados en la identificación, se encontraron tres tipos diferentes del virus.

El TEV, apareció más abundantemente en zonas del Estado Aragua, encontrándose también en plantas procedentes de Cariaco. En ambos sitios su incidencia fue abundante en la época de secano. Estos resultados y la información bibliográfica al respecto (4, 18), parecen indicar una fuerte transmisión por insectos cuya población pudiera fluctuar con la época del año.

El virus Y de la papa ha sido reportado como causante de una de las enfermedades virales más importantes y ampliamente distribuida en pimentón (1, 5). En el trabajo realizado, se logró aislar un tipo del virus en algunas muestras. Además el aislamiento presentó ciertas diferencias en sintomatología y propiedades físicas (5, 16, 18); lo que parece indicar de que se trata de una raza o tipo diferente de las ya conocidas. En otros trabajos (3, 15) relacionados a este virus. se reportan variaciones en virulencia y propiedades físicas, que podrían ser la expresión característica de tipos del patógeno.

La ocurrencia del PVY en siembras de secano y en asociación con el TMV, hace posible que su propagación esté relacionada a insectos vectores y prácticas intrínsecas del cultivo y que su distribución sea mayor que la determinada en este trabajo.

Problemas de asociación virosa, han sido observados con cierta frecuencia en otros. países (13, 14). Sin duda que estas asociaciones crean dificultades mayores para el cultivo, tanto por el rendimiento en sí, como por dificultar aún más, el combate de vectores y la diseminación de estos virus a otros cultivos.  

CUADRO 6. Distribución geográfica de los virus identificados en pimentón. 


Estado y Zonas Epoca de colección (a) Muestras de campo Virus
Nº de  muestras Abundancia del daño (b) 

Aragua Cagua 11/69 3,75 TEV
    6/70 4 5,0 TMV
La Villa 11/69 3 3,75 TEV
    6/70 3 3,75 PVY
  Maracay 11/69 3 3,75 TEV

Lara Barquisimeto 10/69 5 1,75 TMV
    1/70 7 2,0 noaidentif.  

Portuguesa Guanarito 2/70 5 2,0 TMV

Sucre Cumaná  2/70 8 3,0 TMV + PVY 
  Carúpano 2/70 3 4,0 TMV
Cariaco  2/70 6 4,0 TEV

Barinas  Obispo 2/70 2 2,5 TMV

(a) La columna representa mes y año en que se recolectaron las muestras.  
(b) Las cifras de la columna representan cantidad del daño causado por el virus en las muestras. Se usa una escala en la cual 1 significa infección leve y 5 infección virótica muy severa.  

RESUMEN 

Mediante transmisión mecánica en huéspedes diferenciales, sintomatología y propiedades físicas, fueron identificados los virus: mosaico del tabaco (TMV), grabado del tabaco (TEV), y virus Y de la papa (PVY) en cultivos de pimentón. Es este el primer reporte que se hace en Venezuela, sobre tal investigación en este cultivo.

Se dan detalles de los síntomas desarrollados sobre tres variedades usadas para la de pimentón, y en las especies de plantas indicadoras identificación y separación de los virus mencionados.

Tanto la sintomatología como las propiedades físicas de los aislamientos de TMV y TEV, coinciden con los reportes bibliográficos sobre esta virosis en pimentón.

Se aisló un tipo de PVY, el cual parece una forma nueva, no descrita aún, por las diferencias en propiedades físicas, así como por la ausencia de síntomas en el huésped de lesión local, Physalis floridana.

SUMMARY 

The viruses tobacco mosaic (TMV), tobacco etch (TEV). and potato virus Y (PVY) were identified as pathogens of pepper (Capsicum annuum L.) in Venezuela. Details are given on distribution, abundance and symptoms of each virus. A PVY isolate showed some variation from the typical properties reported in the literature, and could be a new form of the virus.

BIBLIOGRAFIA 

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12) MARCHOUX, G. MARROU and E. POCHARD. 1969. Virus of Cap9Ícum in Southem France. Review of Applied Mycology 48: 2707 (Res.).

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18) SMITH, K. M. 1957. Textbook of Plants virus diseases 2a ed. London, Churchill.

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20) STANDEN, J. H. 1952. Indice alfabético de los nombres científicos de huéspedes y patógenos en Venezuela. Bol. Soc. Ven. Ciencias Naturales 14: 53-118.

21) WHITE, J. C. and N. L. HON. 1965. The histology of tabasco peppers infectaded with tobacco-etch virus. Phytopath. 55: 267-269.


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